亚叶酸钙杂质H的制备方法

发布日期:2020/10/26 11:48:35

背景及概述^[1]

亚叶酸钙是叶酸还原型的甲酰化衍生物，系叶酸在体内的活化形式。具有“解救”过量的叶酸拮抗物在体内的毒性反应，有利于胸腺嘧啶核苷酸、DNA、RNA以至蛋白质合成，能刺激白细胞生长和成熟。本品可限制甲氨蝶呤对正常细胞的损害程度，通过相互间竞争作用，并能逆转甲氨蝶呤对骨髓和胃肠黏膜反应，但对已存在的甲氨蝶呤神经毒性则无影响。主要用作叶酸拮抗剂(如甲氨蝶呤、乙胺嘧啶或甲氧苄啶等)的解毒剂。当口服叶酸疗效不佳时，用于口炎性腹泻、营养不良、妊娠期或婴儿期引起的巨幼细胞性贫血以及白细胞减少症。但对维生素B12缺乏性贫血并不适用。近年应用亚叶酸钙作为结肠、直肠癌的辅助治疗，与氟脲嘧啶联合应用，可延长存活期。亚叶酸钙杂质H是亚叶酸钙合成过程中可能产生的杂质之一。

制备^[1]

亚叶酸钙杂质H制备如下：

1)（6R，6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的α-2,6-二氯苄基单酯的制备

将500mg（6R，6S）5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸和56mgNa2CO3添加到20mL二甲基亚砜中317mgα-2,6-二氯苄基溴添加并将混合物在室温搅拌15小时。然后将反应混合物倒入250mL冰冷的水中，并通过离心收集大量橙黄色沉淀。将沉淀物悬浮在另外的250mL冰冷水中，并再次离心。丢弃滤液，并将沉淀物在48小时内冷冻干燥。干燥的粗制混合物随后通过快速色谱法纯化，在硅胶上（粒径范围为0.03-0.075mm的混合物；10：1（v/v）CHCl3--MeOH）洗脱。合并并真空干燥，得到293mg的5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的纯α-2,6-二氯苄基单酯：mp>300C。

2）（6R，6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的α-2,6-二氯苄基单酯的分离

将20mg（6R，6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的α-2,6-二氯苄基单酯（溶于500mL5：1CHCl3--MeOH中）注入41.4mm×25cm硅胶柱（平均粒径约0.008mm;90：10：03（v/v）CHCl3--MeOH-乙酸），流速为81mL/min，检测254nm。出现的两个峰分别收集在分别命名为A和B的烧瓶中。该过程再重复10次（总共200mg）。蒸发过量的溶剂，并将所得固体真空干燥，分别得到81mg峰A和86mg峰B。对所得的固体进行IR，MSHRFAB和1HNMR分析，并给出令人满意的结果。通过在4.6mm×25cm硅胶柱（90：10：0.03（v/v）CHCl3--MeOH-乙酸）上进行色谱比较，初步确定了天然非对映异构体的身份，流速为1ml/254nm检测时间的最小值。（6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的纯正α-2,6-二氯苄基单酯以与峰B相同的方式洗脱。

3）5-甲酰基-5,6,7,8-四氢叶酸的纯（6R）和（6S）非对映异构体的脱保护

将来自峰A和B的1mg固体添加到两个装有10mL0.1NNaOH的12mL试管中。10分钟后，在冰水浴中用乙酸将溶液的pH调节至7。将这些溶液注入白蛋白柱[根据Wainer，IW，Stiffen，RM，J.Chromatography，424，158-162（1988）的方法]明确提供了峰A为纯（6R）-非对映异构体的证据，而峰B为纯的（6S）-非对映异构体。