冬凌草甲素的抗炎功效

冬凌草甲素（Ori）是一种生物活性的菊苣二萜，是冬凌草的主要活性成分，已被广泛用于中药中。冬凌草甲素最近被发现具有抗炎的活性。之前的研究发现，Ori能够抑制NF-κB或活化MAPK以抑制促炎细胞因子的释放。尽管Ori的抗炎活性正在引起人们的注意，但潜在的机制和直接目标尚不清楚。

在炎性的发生机制中，NLRP3炎性体起着中枢的作用。NLRP3炎性体是由先天免疫传感器NLRP3，ASC和caspase-1组成的多蛋白复合物。这种复合物的组装导致caspase-1的激活，促进pro-IL-1β和pro-IL-18的裂解，从而产生成熟和功能性IL-1β和IL-18。NLRP3可以被许多不同的刺刺激源所激活，包括本文的Ori，也被报道能够治疗炎性反应，但是其机理尚不清楚。 

首先我们检测了Ori能够抑制caspase-1的切割和IL-1β分泌，从而阻断NLRP3活化，并且Ori对TNF-α的产生没有影响。之后作者发现Ori不能抑制LPS诱导的前IL-1β，NLRP3表达和TNF-α产生。从而证实Ori特异性抑制NLRP3炎性体激活。

接着，作者研究Ori是如何阻断NLRP3活化。作者发现Ori不影响NLRP3上游的信号传导通路。并且Ori能够抑制尼日利亚菌素诱导的内源性NLRP3炎性体复合物形成，并发现其阻断了内源性NEK7-NLRP3和NLRP3-ASC相互作用，表明Ori可能通过阻断NLRP3来阻止NLRP3- NEK7炎性体组装。

由于Ori能通过阻止NLRP3-NEK7相互作用来阻止NLRP3炎性体组装，作者猜测Ori可能直接靶向NLRP3或NEK7。作者发现LPS- BMDM的细胞裂解物与bio-Ori一起孵育时，NLRP3能够在bio-Ori pull down实验中鉴定到，而NEK7,ASC或caspase-1则没有被鉴定到。

为了进一步检验Ori是否直接结合NLRP3，作者将纯化的NLRP3蛋白与bio-Ori一起孵育，并且通过bio-Ori pull down GFP-NLRP3，证实Ori直接与NLRP3相互作用。考虑到Ori的结构，作者猜测Ori能够特异与NLRP3上的半胱氨酸形成共价的化学键，因此，我们构建了NLRP3突变体，将其中的九个半胱氨酸都突变成为丙氨酸，结果显示半胱氨酸279（C279A）的突变消除了NLRP3与Ori的结合。最后，作者发现Ori处理显着减轻了WT小鼠中MSU诱导的IL-1β产生和中性粒细胞迁移，但在NLRP3 - / - 小鼠则不会。 

总之，本文显示Ori可以靶向NLRP3以发挥其抗炎活性。并且Ori在与Cys279共价结合时，Ori阻断NLRP3-NEK7相互作用和随后的NLRP3炎性体组装和活化，导致NLRP3相关疾病的有效抑制。