三七皂甙R1的制备方法

背景及概述^[1]

三七皂甙R1为中药三七总皂甙的主要成分之一。报导三七皂甙可增加小鼠脾细胞内cAMP含量，从而提高脾细胞杀伤力，增强免疫功能。三七复方制剂常用于治疗各种肿瘤如胃癌，肝肾纤维化及化疗后出血，有一定疗效。采用细胞体外培养技术，通过细胞形态学，细胞化学，表面膜抗原的检测，研究表明三七皂甙R130-120μg/ml-1能诱导HL-60细胞向粒细胞转化，用H3-TdR，H3-UR掺入实验得出三七皂甙R1抑制细胞DNA，RNA的合成，可能是其抗肿瘤的机制之一，具体机制尚有待深入研究。又有研究表明，某些药物如拓扑异构酶抑制剂低浓度时可导白血病细胞分化，而中高浓度时可阻滞细胞在G2期，进一步引起细胞凋亡，极高浓度时可引起细胞坏死。

制备[2]

1)称取三七粉100g加入500ml甲醇，浸泡36小时，过滤后，将滤液蒸干得甲醇提取物。将此甲醇提取物用蒸馏水300ml溶解后，先用等体积的石油醚(沸程为60-90℃)萃取两次，弃去上相，取下层水相用等体积的正丁醇萃取两次，将所得正丁醇相合并蒸干，得10.2g三七皂甙粗提物。

2）利用高速逆流色谱(HSCCC)步分离得到三七皂甙R1、人参皂甙Re地混合物。采用氯仿、甲醇、丙醇、水体系，其中氯仿∶甲醇∶丙醇∶水＝6∶6∶1∶4(体积比)取三七皂甙粗提物，其上样量200mg，柱体积200ml，主机转数800rpm，上相作固定相，下相作流动相，流动相流速2ml/min。操作步骤：按各溶剂体积比配制溶剂体系，在分液漏斗中静置分层，分出上下相，上相作固定相、下相作流动相，使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进样。由于三七皂甙R1及人参皂甙Re没有紫外吸收，所以无法使用高速逆流色谱仪(HSCCC)所配的常规紫外检测器检测出峰及分离情况。因此，本实验中采用自动集分收集器，设定时间，分段收集高速逆流色谱仪上样后洗脱下的各级分。然后以薄层色谱检测分析各吸分管，采用与药典相同的展开条件，通过与药典中提供谱图比较。收集含有三七皂甙R1和人参皂甙Re的级分。通过以上分离，可得三七皂甙R1及人参皂甙Re混合物13mg。

3）用高速逆流色谱仪将上述分离得到的混合物进行进一步分离(第二步分离)：采用乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶3体积比，上样量为步多次分离所得产物共40mg，柱体积200ml，主机转数800rpm。上相作固定相，下相作流动相，流动相流速2ml/min。操作步骤同上，以集分收集器收集，洗脱的各级分经薄层色谱检测分析并与药典中提供谱图比较，保留含有三七皂甙R1与人参皂甙Re的级分。

应用^[3]

三七皂甙R1是五加科人参属植物三七的一种特征性成分，通过观察UVA及UVB照射对体外培养的人皮肤成纤维细胞增殖、胶原合成及MMP-1水平表达的影响以及加入三七皂甙R1的干预作用，探讨三七皂甙R1对紫外线诱导的人皮肤成纤维细胞的保护作用及其相关分子机制，结果三七皂甙R1浓度为5μg／ml、20μg／ml时经紫外线照射的FB细胞增殖活性增加；三七皂甙R1浓度在50μg／ml以下时可增加紫外线照射后成纤维细胞培养上清中羟脯氨酸的含量及总胶原分泌量.且浓度在20μg／m1时，羟脯氨酸的含量及总胶原分泌量最高；三七皂甙R1浓度为5μg／ml及20μg／ml时抑制MMP-1的分泌，并且以20μg／ml浓度时抑制作用最明显。

主要参考资料

[1] 三七皂甙R1诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

[2] CN01136697.4从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法

[3]  三七皂甙R1对紫外线辐射后皮肤成纤维细胞增殖、胶原合成及MMP-1水平的影响