革兰氏染色液的制备及应用

概述^[1][2]

革兰氏染色液可用于革兰氏染色法，革兰氏染色法是一种在细菌学中广泛应用的重要鉴别染色方法。1884年由丹麦医师Gram氏创立，故名革兰氏染色法。

制备^[1]

一、革兰氏染色液，首先采用结晶紫溶液或龙胆紫溶液(95％酒精 100毫克，结晶紫400毫克)20毫克、1％草酸铵溶液8毫克，分别 配合，然后混合；其次采用卢戈氏碘液，碘化钾200毫克、碘100 毫克、蒸馏水300毫克，先用200毫克蒸馏水，将200毫克碘化钾 溶解，然后再加入100毫克碘充分混合，使碘完全溶解，然后加蒸馏水至300毫克；再一种是脱色剂，采用95％酒精；最后用复染液、碱性复红10毫克、95％酒精10毫克、5％石碳酸90毫克。其操作步骤是：首先涂片在火焰上固定，滴加结晶紫溶液染1分钟，水洗，其次是滴加卢戈氏碘液，染1分钟后水洗；再次是滴加95％酒精脱色，此时应将玻片不时摇动，直至无紫色脱落为止，30秒钟后水洗； 第四是滴加复染液染1分钟，水洗，待干，镜检。

 二、CN01114296.0一种易配制、不变质、成本低、保存时间长的快速革兰氏染色液。本发明的目的是这样实现的：染色液，由如下几种原料配制：

A、结晶紫溶液

    结  晶  紫    600-1000毫克  无水乙醇  8-12毫克

    丙二醇甲醚    8-12毫克      草 酸 铵  700-900毫克

    蒸  馏  水    70-90毫克

    混合均匀，不产生沉淀，保存1-2年。

B、碘液

  碘化钾200-500毫克    碘50-300毫克

  氯化钠  150-350毫克    蒸馏水80-120毫克

  混合均匀，呈棕色并存放，不变质，保存1-2年。

C、脱色剂

  丙  酮  35-45毫克    95％乙醇55-65毫克

  混合均匀。

D、复染液

  碱性品红  450-550毫克    无水乙醇8-12毫克

  5％石碳酸  8-12毫克      吐温-80 200-500毫克

  蒸馏水    70-90毫克

其操作方法是：

1、涂片经火焰固定，加结晶紫溶液，染3-7秒水洗，用滤纸 吸干水份；

2、加碘液染3-7秒，水洗，用滤纸吸干水份；

3、加脱色剂不断摇动，至无紫色脱落为止10-30秒，水洗；

4、加复染液染3-7秒，水洗，干后镜检。 便得菌体呈紫色为革兰氏阳性菌，呈红色为革兰氏阴性菌。

快速革兰氏液的碘液进入菌体后，有足够地量迅速与结晶紫结合，此结合物又与革兰氏阳性菌体内的核糖核酸镁盐蛋白质复合物结合，因此，革兰氏阳性菌摄取结晶紫多且较牢固、革兰氏阴性菌 缺乏核糖核酸镁盐，所以，不与结晶紫结合，而被石碳酸复红结合。革兰氏阳性菌的等电点(PH2-3)比阴性菌(PH4-5)为低，在一定PH下所带负电荷较多，因此容易和带正电荷的碱性染料结合， 不易被脱色剂脱色。革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌菌膜的通透性不同，脱色剂相应采用95％酒精和丙酮的混合液，革兰氏阳性菌不易透入，故不易脱色，由于丙酮溶解性强，使染料和碘复合物溶解彻底，所以，不会产生假革兰氏阳性菌。

应用^[3]

CN201710462157公开了一种亚型Ph-likeALL的检测试剂盒，包括12组荧光探针和复染液；12组所述荧光探针分别为ABL1，ABL2，CSF1R，PDGFRB，CRLF2，JAK2，EPOR，IL2RB，NTRK3，PTK2B，TSLP和TYK2；所述复染液由以下重量份数的组分组成：革兰氏染色液5~7份，生理盐水1~3份，纤维素0.2~0.6份，荧光素0.5~0.7份，磷酸一铵0.1~0.3份。本试剂盒检测囊括了目前已知的所有针对性用药的Ph-likeALL类型，经探针溶液与样本变性杂交后，滴加复染液，能够全面准确地检测Ph-likeALL。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN01114296.0 快速革兰氏染色液及方法

[2] 海洋大辞典

[3]CN201710462157.X一种亚型Ph-likeALL的检测试剂盒及其检测方法