百脉根苷的含量测定

背景及概述^[1]

红景天为景天科红景天属(RhodiolaL.)多年生草本或亚灌木植物的统称，民间多以其匍匐的根状茎作为药用。早在1200年前的藏医《四部医典》中已将其作为“神药”，1596年李时珍《本草纲目》中记有“景天、上品、甘涩、寒、无毒、治肺疾”。红景天是中药“适应原样作用”研究最具代表性的品目，依据植物形态特征差异，GBIF2010（全球生物多样性信息网）统计，红景天属植物全世界共有136个种，我国73种，2个亚种和7个变种。

红景天属植物进行过化学成份研究的种有47个，从中分离出了近300种化合物，人们基于8种化学成分：红景天苷、络塞维、rosarin、rosavin、酪醇、儿茶酸、草质素苷和没食子酸的差异性建立了化学分类系统，其中红景天苷和没食子酸是红景天种的共有成分。研究发现红景天根中所含百脉根苷（lotaustralin）成分在生药粉碎和饮料加工过程中会被生氰糖苷水解酶linamarase分解，产生毒理成分氢腈酸，是红景天提取物临床应用过程中产生收敛作用和便秘的主要原因。

含量降低方法^[1]

红景天提取中百脉根苷的降低方法，其步骤如下：

a、将红景天根风干后粉碎，过45～60目筛，得到红景天根粉末，称重，装入超临界萃取釜中；

b、在超临界萃取釜中萃取，萃取温度为30～50℃，CO2流体压力为20～40MPa，夹带剂流速0.2～0.5ml/min，萃取时间1～3h，萃取物用甲醇吸收为吸收液，所述甲醇与红景天根粉末的体积质量比为50ml:100g，所述夹带剂由乙醇、石油醚、水按照质量比5：1：4配置而成；该夹带剂可将药材中红景天苷、络塞维等活性成分提出，而百脉根苷提出量极低；

c、吸收液用D101型大孔树脂层析，每小时两个柱床体积流速的蒸馏水洗脱至流出液无色，再用10个柱床体积的质量百分浓度80%乙醇洗柱子，乙醇洗脱液在450～500Pa条件下减压浓缩至近干，105℃干燥24h，得到浅红色红景天提取物。

含量测定^[2]

一种亚麻籽中亚麻苦苷和百脉根苷的测定方法，具体包括如下步骤：

(1)标准曲线的制作：准确称量亚麻苦苷和百脉根苷标准品，用50％乙腈-50％水分别配制成浓度为100μg/mL的标准溶液，分别取1、2、3、4、5mL用50％乙腈-50％水定容至50mL，配制成浓度为2、4、6、8、10μg/mL的标准品系列溶液，分别进样10μL进行高效液相分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得到亚麻苦苷和百脉根苷的标准曲线方程。液相分析条件为：AtlantisC色谱柱；流动相：乙腈-水(85：15，V/V)；流速1mL/min，柱温30℃，进样量5μL。采用蒸发光检测器(ELSD),气体流速2L/min，漂移管温度85℃，增益值为2。

(2)样品的前处理：

①亚麻籽油样品处理：取1mL亚麻子油加2mL50％乙腈-50％水溶液超声提取10min(温度为50℃、超声功率250W)后再振摇1min，如此反复3次，静置分层，取上清液过0.45微米滤膜后，得样品溶液做液相分析。

②亚麻籽粉样品处理：取200mg固体样品加2mL50％乙腈-50％水溶液超声提取10min(温度为50℃、超声功率250W)后振摇1min，如此反复3次，然后10000rmp离心2.5min，取上清液过0.45微米滤膜后，得样品溶液做液相分析。

③亚麻籽粕的处理：亚麻籽粕碾碎成粉后取500mg样品加入5mL50％乙腈-50％水溶液超声提取10min(温度为50℃、超声功率250W)后振摇1min，如此反复3次，然后10000rmp离心2.5min，取上清液过0.45微米滤膜后，得样品溶液做液相分析。

(3)样品测定：步骤(2)所得到的样品溶液进行液相分析，液相分析条件为：AtlantisC色谱柱；流动相：乙腈-水(85：15，V/V)；流速1mL/min，柱温30℃，进样量5μL。采用蒸发光检测器(ELSD),气体流速2L/min，漂移管温度85℃，增益值为2。

(4)亚麻苦苷和百脉根苷含量的计算：对步骤(3)得到的样品图谱进行定位和积分，得到峰面积，由步骤(1)得到的标准曲线计算出样品中亚麻苦苷和百脉根苷的浓度，从而得到对应亚麻籽产品中亚麻苦苷和百脉根苷的含量。

主要参考资料

[1]CN201811561472.9红景天提取中百脉根苷的降低方法

[2]CN201810837039.7一种亚麻籽产品中抗营养因子亚麻苦苷和百脉根苷的检测方法