牛肉浸粉

【背景及概况】^[1][2]

牛肉浸粉为一种培养基原料，是用精牛肉，采用新工艺提取而成，色泽呈黄褐色，含有多种营养成份，适合做微生物培养用原料，提供细菌生长所需的生长因子。牛肉浸粉中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质等，主要为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，一般使用浓度为 3g/L。有试验采用牛肉浸粉不同浓度的配方配制基础培养基，接种标准菌株在基础培养基中添加浓度为 1-7g/L 的牛肉浸粉时，菌株生长良好，得分范围为 1.8-2.0；菌落典型，得分均为 3.0；抑制性较差，得分范围为 1-2；培养基外观较好，得分均为 3.0；牛肉浸粉添加浓度为 3-5g/L 时，基础培养基的性能指标较高，为 10，其余浓度的为 9.0。说明牛肉浸粉的添加浓度在 3-5g/L 时效果较好。

【外观】

牛肉浸粉为一种培养基原料，是用精牛肉，采用新工艺提取而成，色泽呈黄褐色：

【制备】^[2]

牛肉浸粉以新鲜牛肉为原料，经热处理，过滤、浓缩、干燥制成牛肉原粉，再将牛肉原粉经过水解、固液分离、冷藏、过滤、浓缩及干燥等工序获得。

【应用】^[2][3][4]

牛肉浸粉主要作为培养基原料使用。

1. 一种血琼脂培养基的改良配方，由胰蛋白胨、牛肉浸粉、肝脏消化物、酵母提取物、淀粉、氯化钠、脱纤维羊血和琼脂组成，其中每1000ml培养基中，含有胰蛋白胨10～20g、牛肉浸粉3～8g、肝脏消化物1～4g、淀粉0.5～2g、酵母粉3～8g、氯化钠3～8g、脱纤维绵羊血 40～60ml、琼脂10～20g，pH＝7.2±0.2。

本发明中所述胰蛋白胨为国产，以新鲜牛肉和牛骨为原料经胰酶消化后制成。能够比蛋白胨提供更多的碳氮源、维生素和生长因子；所述牛肉浸粉为国产，以新鲜牛肉为原料，经热处理，过滤、浓缩、干燥 制成牛肉原粉，再将牛肉原粉经过水解、固液分离、冷藏、过滤、浓缩及干燥等工序获得。杂质少，能够提供有机酸、核苷酸、矿物质、维生素等；所述肝脏消化物为进口，肝脏酶解产物，能够提供丰富的肝糖原、维生素和氨基酸，对各种细菌有明显的促生长作用，特别是对布鲁氏菌与阿米巴原虫效果极好，另外能够更好地对厌氧菌进行培养；所述淀粉为国产。淀粉能提供部分碳与氮，并促进奈瑟氏菌的生长和增 强链球菌的溶血特性，并且能够吸收细菌产生的一些毒素，能够使细菌生长更加良好；所述酵母浸粉为进口，以新鲜酵母为原料，能够提供B族维生素和各种氨基酸以及糖类。本发明的血琼脂培养基改良配方能够提供全面营养，维持细菌渗透压，修复受损 细菌。采用本发明优化后的配方，不仅可以满足普通细菌与大部分苛养菌的全面需要，而且 有利于细菌的培养与鉴定。

2. 一种促进产气荚膜梭菌高产外毒素的培养基，所述培养基由下述重量份的成分组成：牛肉浸粉18‑30重量份，大豆蛋白胨6‑15重量份，葡萄糖4‑8重量份，NaCl 3‑6重量份，加水至1000重量份。本发明的优选技术方案中，所述培养基的pH值为7.0‑8.5，优选pH值为 7.5‑8.0；所述的产气荚膜梭菌选自A型产气荚膜梭菌、B 型产气荚膜梭菌、C型产气荚膜梭菌、D型产气荚膜梭菌、E型产气荚膜梭菌的任一种或其组合，优选为C型产气荚膜梭菌。

3. 一种快速培养金黄色葡萄球菌的方法，是向含有牛肉浸粉的溶液中同时加入氨肽酶和蛋白酶进行酶解，以 酶解后的溶液作为培养基成分对金黄色葡萄球菌进行培养。所述培养基中还含有NaCl、蛋白胨；所述培养基中酶解前的牛肉浸粉、NaCl和蛋白胨的质量比为：8～12:1:3～5。所述酶解是按200U/g牛肉浸粉的加酶量加入氨肽酶，和/或按0.44～1.5×104U/g牛肉浸粉的加酶量加入中性蛋白酶；所述酶解是对浓度为100～140g/L牛肉浸粉溶液进行酶解；所述氨肽酶添加量为200U/g牛肉浸粉；所述中性蛋白酶添加量0.44～1.5×104U/g牛肉浸粉；所述酶解是在40℃～50℃下进行；所述酶解时间为1～5h；所述酶解pH为7.5～8.0；所述培养金黄色葡萄球菌在培养前经过活化，所述活化培养基LB成分为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L；所述培养是在36～38℃培养10～42h；所述牛肉浸粉的浓度为120g/L，氨肽酶添加量200U/ g底物，中性蛋白酶添加量2.5×104U/g底物，反应温度50℃，pH7.5，反应时间1h。本发明提供了一种快速检测金黄色葡萄球菌的一种氮源的酶解优化策略，从而促进金黄色葡萄球菌的生长。经过酶解后的牛肉浸粉中多肽分子量小于500的占总量的75.48％，对金黄色葡萄球菌有明显的促生长作用，使其在同菌浓条件下培养24h后获得的OD值分别是酶解前和市场销售牛肉浸粉的2倍和2.9倍。

【参考文献】

[1] 杨咏康. 一种 B 群链球菌临床检测方法的研制[D]. 郑州大学, 2016.

[2] 李娜.一种血琼脂培养基的改良配方. CN201610964116.6，申请日2016-11-04

[3] 熊媛媛;蒋玉文;漆世华;黄涛;郑佳;朱薇;谢红玲;温文生. 一种促进产气荚膜梭菌高产外毒素的培养基及其培养方法和其应用. CN201310086236.7，申请日2013-03-19

[4] 田亚平;龙婧;李婷婷;王全林;皮许生.一种快速培养金黄色葡萄球菌的方法. CN201710544480.1，申请日2017-07-0