ALPHA-腺苷的制备方法

背景及概述^[1]

反义技术(AntisenseTechnology)是根据碱基互补原理，用人工合成或生物体合成的特定DNA或RNA片段抑制或封闭基因表达的技术，是一种新的药物开发方法。1990年，Debart等首次报道了寡聚α-尿嘧啶核苷酸的合成，并证实它能阻止多种蛋白酶的非专一性降解。构建α构型的寡核苷酸的重要单体为α核苷。

对于α核苷的合成，文献中报道了两种方法。其中一种方法以酰基保护型的糖E为原料，通过Silyl-Hilbert-Johnson反应条件与四大不同的(或保护的)碱基偶联得到化合物F，化合物F脱保护后得到产物α核苷。此方法较经典，但在糖与碱基的偶联反应中，反应的选择性不好，大多情况下构型的产物为主要产物，从而导致目标α构型的偶联产物收率较低；在该反应选择性不好的情况下，进而导致分离纯化(柱层析或结晶方式)此α构型的差向异构体往往非常不容易。文献中报道的另一种α核苷的合成方法为：该方法通过D-核糖与氨基氰一步反应得到关键中间体氨基噁唑糖化合物G，化合物G通过两步转化得到关键前体化合物F，F经水解得到产物α胞苷；化合物G与丙烯酸甲酯环合得到关键前体化合物G，G经水解得到产物α尿苷。该方法能够得到选择性非常好的α胞苷和α尿苷，但不适用于α构型的腺苷和鸟苷的合成，因而通用性不强。因此，设计一种选择性好，通用性强，工艺纯化方法简单的α核苷合成新方法，将对于α构型的寡核苷酸药物的研究和制备具有非常积极的意义。

制备^[1]

ALPHA-腺苷的合成：

(1)合成化合物A粗品

将100g5-O-叔丁基二甲基硅烷-2，3-O-异亚丙基-D-呋喃核糖用乙腈浓缩除水多次，控制水分小于≤300ppm；氩气保护下，将5-O-叔丁基二甲基硅烷-2，3-O-异亚丙基-D-呋喃核糖用1000mLTHF溶解，置换空气3次，体系降温至-70±5℃，向其中一次性加入75.8g四氯化碳；向反应液中滴加三(二甲胺基)膦69.6g，控制加入温度-70±5℃。将反应液温度控制-70±5℃下搅拌1h；1h后，将反应液回温至-40±3℃下搅拌反应2h，得到含化合物II的反应液，记为反应液1。氩气保护下，将41.1g6-氯嘌呤悬浮于400mL乙腈中；将反应液降温至0±3℃，向其中加入21.2g氢化钠，控制加入时体系温度0±3℃，加料完毕后，体系重新置换氩气三次，搅拌反应30分钟，记为反应液2。将反应液1一次性加入反应液2中，0±3℃继续搅拌反应1h，1h后，缓慢回温至室温后，25℃下搅拌反应，每小时进行HPLC监控，反应18小时直至产物不再增加视为反应结束。反应结束，向反应液中加入2L乙酸乙酯，并将反应液倒入2L5％氯化铵冰水溶液中淬灭反应，搅拌30分钟，萃取。水相用1L乙酸乙酯洗涤2次。合并有机相用100g无水硫酸钠搅拌干燥，滤去无水硫酸钠滤液于40±3℃下减压浓缩至无冷凝液滴下，得油状液体82g化合物A粗品。

(2)合成化合物E粗品

在反应瓶中加入上一步得到油状液体82g化合物A粗品，乙腈(309.4ml)，水(15.6ml)和阳离子树脂(7.79g)；加料完毕后，在50℃油浴中搅拌反应。检测：反应2小时后每2小时取样送样HPLC检测；若HPLC检测原料<1％则反应完成，加热终止；否则继续反应。过滤：反应完毕降至室温后，滤去阳离子树脂，用30ml水淋洗两次；中和：滴加1NNaOH调节反应液pH值至7.1-7.3，期间温度控制在30度以下；浓缩：滤液于45±2℃下减压浓缩干，用ACN带水多次得到粗品79g化合物E。

(3)合成化合物ALPHA-腺苷

在反应瓶中加入79g化合物E，甲醇(400ml)，降温至0度，后通入氨气45分钟，冲入氨气100克，将反应液转移至高压反应釜中。加料完毕后，在50℃油浴中搅拌反应。至温度稳定时压力为0.3Mpa，反应48小时后取样送样HPLC检测；若HPLC检测原料<10％反应完成，加热终止；否则继续反应。浓缩：反应液于40±2℃下减压浓缩干。快速硅胶柱层析得产品ALPHA-腺苷13.5g，四步总分离收率15.4％(mol)，13.5％(w)，纯度98.55％。

质谱：MS(ESI)m/z268.5(M+H+，100)。1HNMR(DMSO-d6)：δ3.45-3.55(m，2H)，4.03-4.20(m，2H)，4.41-4.46(m，1H)，4.80(t，1H)，5.46(d，1H，J＝5.4Hz)，5.45(d，1H，J＝5.4Hz)，6.34(d，1H，J＝5.4Hz)，7.21(brs，2H)，8.13and8.30(2s，2x1H).

主要参考资料

[1]CN201710889221.2一种α核苷合成方法