DNA PULLDOWN试剂盒

背景操作方法用途

DNA PULLDOWN试剂盒性质、用途与生产工艺

背景现有研究DNA-蛋白相互作用的技术方案有多种，如酵母单杂交(Y1H)方法、ChIP-seq方法、凝胶迁移实验(EMSA)和DNA pulldown方法。DNA pulldown方法是一种非常重要的蛋白质-DNA相互作用的研究方法。该方法可以在同一个样品中分离DNA-蛋白复合体。通常，是通过高亲和性的标签(如生物素)标记DNA，标签的目的是固定DNA，通过琼脂糖珠子或磁珠可以分离出生物素化的DNA，从而分离出细胞裂解液中的DNA-蛋白复合体。分离出的蛋白进行洗脱后可以通过Western Blot进行检测，或通过质谱进行筛选
操作方法 S1、磁珠预处理：使用BSA(牛血清白蛋白)和寡核苷酸随机引物封闭链霉亲和素标记的磁珠；S2、制备探针‑磁珠复合物；S3、提取并预处理细胞核蛋白：向提取核蛋白样品中加入脱氧核糖核酸酶孵育，再加入磁珠孵育，去除磁珠，收集上清；S4、pulldown；S5、蛋白样品的收集。
用途 DNA pulldown是一种用于研究DNA与蛋白质互作的技术。通常用来分析目标基因调控区域相结合的转录因子及其他调控蛋白。针对目标区域设计脱硫生物素标记的特异性DNA探针，并与细胞核提取物孵育。通过偶联磁珠，经洗脱，得到目的DNA探针-蛋白质复合物。最后采用Western Blot或质谱鉴定蛋白质类型。

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