人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒

实验原理操作步骤

人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒性质、用途与生产工艺

实验原理
人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
操作步骤
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅

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