1268524-70-4

1268524-67-9

1068-57-1

1268524-70-4

在-78°C下，将叔丁醇钾（1.0M THF溶液，0.3 mL，0.30 mmol，1.10当量）缓慢滴加到(S)-2-(5-(4-氯苯基)-6,7-二甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-噻吩并[2,3-e][1,4]二氮杂卓-3-基)乙酸叔丁酯（114 mg，0.27 mmol，1当量）的THF（1.8 mL，0.15 M）溶液中。将反应混合物缓慢升温至-10°C，并在23°C下搅拌30分钟。随后，将反应混合物重新冷却至-78°C，并加入氯代磷酸二乙酯（0.047 mL，0.32 mmol，1.20当量）。所得混合物在45分钟内缓慢升温至-10°C。接着，加入乙酰肼（30 mg，0.40 mmol，1.50当量），并在23°C下继续搅拌反应混合物。1小时后，加入1-丁醇（2.25 mL），并将反应混合物加热至90°C。再反应1小时后，在减压下移除所有溶剂。残余物通过快速柱色谱法（Combiflash系统，4 g硅胶，梯度0至100%乙酸乙酯-己烷）纯化，得到目标产物(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-F][1,2,4]三唑并[4,3-A][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸叔丁酯（114 mg，92%收率），为白色固体，对映体纯度为90%（通过Berger超临界流体色谱法（SFC）测定，使用AS-H柱，85%己烷-甲醇，210 nm检测波长，tR（R-对映体）= 1.59 min，tR（S-对映体）= 3.67 min）。进一步通过手性制备型HPLC（Agilent高压液相色谱法，使用OD-H柱）纯化，得到对映体纯度大于99%的S-对映体。1H NMR（600 MHz，CDCl3，25°C）δ 7.39（d，J = 8.4 Hz，2H），7.31（d，J = 8.4 Hz，2H），4.54（t，J = 6.6 Hz，1H），3.54-3.52（m，2H），2.66（s，3H），2.39（s，3H），1.67（s，3H），1.48（s，9H）。13C NMR（150 MHz，CDCl3，25°C）δ 171.0，163.8，155.7，150.0，136.9，131.1，130.9，130.6，130.3，128.9，81.2，54.1，38.1，28.4，14.6，13.5，12.1。HRMS（ESI）计算值C21H24ClN2O3S [M + H]+：457.1460，实测值457.1451 m/z。TLC（EtOAc），Rf：0.32（UV）。[α]22D = +75（c 0.5，CHCl3）。

参考文献：

[1] Patent: WO2011/143657, 2011, A1. Location in patent: Page/Page column 82-83

[2] Patent: WO2017/30814, 2017, A1. Location in patent: Paragraph 00227

[3] Patent: WO2018/109053, 2018, A1. Location in patent: Page/Page column 22; 23

(+)-JQ1对映体直接结合到BET bromodomain结构域的Kac结合位点。(+)-JQ1(500 nM)与染色质竞争性结合到BRD4，导致NMC细胞分化和生长停滞。通过Ki67染色减少，证明了(+)-JQ1(500 nM)减弱NMC 797和Per403细胞系的快速增殖。(+)-JQ1(500 nM)作用于NMC 797细胞，有效降低BRD4靶基因的表达。(+)-JQ1作用于NMC 11060细胞，抑制细胞活力， IC50为4 nM。(+)-JQ1作用于MM细胞系，强抑制MYC表达。(+)-JQ1抑制KMS-34和LR5增殖，IC50分别为 68 nM和98 nM。(+)-JQ1(500 nM)处理MM.1S细胞，导致S期细胞比例明显下降，随之细胞停滞在G0/G1期增多。(+)-JQ1(500 nM)通过β-半乳糖苷酶染色，导致明显的细胞衰老。(+)-JQ1(800 nM)处理CD138+病患衍生的MM样本，显著降低细胞活力。 (+)-JQ1抑制LP-1细胞生长，GI50 为98 nM。(+)-JQ1(625 nM)导致LP-1细胞在G0/G1期的百分数增高。(+)-JQ1(500 nM)作用于LP-1细胞，抑制MYC, BRD4 和CDK9表达。(+)-JQ1(1 μM)处理潜伏感染的Jurkat T细胞，激活HIV转录。(+)-JQ1(50 μM)作用于Jurkat和HeLa细胞，主要刺激Tat依赖性的HIV转录。(+)-JQ1(5 μM)作用于J-Lat A2细胞，诱导Brd4解离，从而使Tat招募SEC到HIV启动子上，诱导Pol II CTD磷酸化和病毒转录。