PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称：猪乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒
英文名称：详见说明书
编号： FSP2822
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Human PKR2(Prokineticin Receptor 2) ELISA KitHuman OCT(Ornithine Carbamoyl Transferase) ELISA Kit三氯化铟 四水合物 细胞TSH-BETA蛋白表达荧光定量检测试剂盒
Human PL(Placental Lactogen) ELISA KitHuman OFQ/N(Orphanin FQ/Nociceptin) ELISA Kit吲哚 TSH-BETA蛋白表达西方杂交分析试剂盒
Human PLA1(Phospholipase A1) ELISA KitHuman OLAb(Anti-Oxidized Low Density Lipoprotein Antibody) ELISA Kit吲哚TSH-BETA蛋白免疫共沉淀分析试剂盒
Human PGF2α(Prostaglandin F2α) ELISA KitHuman OLFM4(Olfactomedin 4) ELISA Kit碘乙腈TSH-BETA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
Human PGD2S(Prostaglandin D2 Synthase, Brain) ELISA KitHuman ON(Osteonectin) ELISA Kit碘乙腈 细胞IL蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒
Human PLA2G10(Phospholipase A2, Group X) ELISA KitHuman OTR(Oxytocin Receptor) ELISA Kit铁粉载玻片细胞IL蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human PLA2G12B(Phospholipase A2, Group XII B) ELISA KitHuman OVA sIgE(Ovalbumin Specific IgE) ELISA Kit铁粉冰冻切片组织IL蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human PLA2G4D(Phospholipase A2, Group IV D) ELISA KitHuman OVA sIgG(Ovalbumin Specific IgG) ELISA Kit还原铁粉石蜡切片组织IL蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
猪乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒葛根黄酮8羟基脱氧鸟苷检测试剂盒5mg153-98-0Mouse L-Selectin Elisa Kit HPLC98%8羟基脱氧鸟苷检测试剂盒5mgPDE22mlCAS号：透析袋 MD44(8000-14000)D 美国68157-60-81244-58-296T环加氧酶2(PTGS2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%8羟基脱氧鸟苷检测试剂盒5mgPDE254970-72-8高端化学试剂重肽神经丝蛋白(NEFH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)75mgCAS号：透析袋 MD55(3500D ) 美国11024-24-113956-29-196TDickkopf相关蛋白1(DKK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶检测试剂盒5mgGPX14348-40-4高端化学试剂钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶检测试剂盒5mg625-82-1Mouse L-Selectin Elisa Kit HPLC98%8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶检测试剂盒5mgGPX75mgCAS号：透析袋 MD55(3500D ) 美国11024-24-113956-29-196TDickkopf相关蛋白1(DKK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶检测试剂盒5mgGPX14348-40-4高端化学试剂钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号：透析袋 MD55(7000D ) 美国11024-24-164052-90-096T羟赖氨酸(Hyl)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6酮前列腺素F1a检测试剂盒5mgRECQL-514348-40-4高端化学试剂钠/葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
黄芪甲甙；黄芪皂苷IV6酮前列腺素F1a检测试剂盒5mg625-82-1BUN Elisa KitHPLC98%6酮前列腺素F1a检测试剂盒5mgRECQL-550mgCAS号：透析袋 MD55(7000D ) 美国11024-24-164052-90-096T羟赖氨酸(Hyl)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6酮前列腺素F1a检测试剂盒5mgRECQL-514348-40-4高端化学试剂钠/葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号：透析袋 MD55(8000-14000)D 美国92-48-820675-51-896T金属蛋白3(MT3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6酮前列腺素检测试剂盒5mgapo-A14348-40-4高端化学试剂睾丸阴离子转运蛋白1(TAT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
黄芪皂甙I6酮前列腺素检测试剂盒5mg625-82-1BUN lisa KitHPLC98%6酮前列腺素检测试剂盒5mgapo-A50mgCAS号：透析袋 MD55(8000-14000)D 美国92-48-820675-51-896T金属蛋白3(MT3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6酮前列腺素检测试剂盒5mgapo-A14348-40-4高端化学试剂睾丸阴离子转运蛋白1(TAT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)1mlCAS号：透析袋 MD77(8000-14000)D 美国92-48-870677-47-396T棕榈酰化膜蛋白5(MPP5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6-羟多巴胺检测试剂盒5mgLp-A139-13-9高端化学试剂再生胰岛衍生蛋白1β(REG1β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
黄芪皂甙II6-羟多巴胺检测试剂盒5mg455-19-6 ALT Elisa KitHPLC98%6-羟多巴胺检测试剂盒5mgLp-A1mlCAS号：透析袋 MD77(8000-14000)D 美国92-48-870677-47-396T棕榈酰化膜蛋白5(MPP5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6-羟多巴胺检测试剂盒5mgLp-A139-13-9高端化学试剂再生胰岛衍生蛋白1β(REG1β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)20mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽16 截留分子量30000092-48-8163136-19-496T内吗啡肽2(EM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%60S核糖体蛋白L36a-样检测试剂盒5mgEREG16009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体1(GRIA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
黄芪皂甙III60S核糖体蛋白L36a-样检测试剂盒5mg455-19-6 ALT Elisa KitHPLC98%60S核糖体蛋白L36a-样检测试剂盒5mgEREG20mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽16 截留分子量30000092-48-8163136-19-496T内吗啡肽2(EM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%60S核糖体蛋白L36a-样检测试剂盒5mgEREG16009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体1(GRIA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)100mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽16 截留分子量100000090-33-553452-34-996T粘蛋白5AC(MUC5AC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%60S核糖体蛋白L17检测试剂盒5mgDERL116009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体2(GRIA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
60S核糖体蛋白L17检测试剂盒5mg455-19-6TLR4 Elisa KitHPLC98%60S核糖体蛋白L17检测试剂盒5mgDERL1100mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽16 截留分子量100000090-33-553452-34-996T粘蛋白5AC(MUC5AC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%60S核糖体蛋白L17检测试剂盒5mgDERL116009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体2(GRIA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽18 截留分子量100090-33-517397-93-296T8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%5-羟色胺受体6检测试剂盒5mgSTR16009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体2(GRIA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
环维黄杨星D;环常绿黄杨碱D5-羟色胺受体6检测试剂盒5mg617-36-7TLR4 Elisa KitHPLC98%5-羟色胺受体6检测试剂盒5mgSTR50mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽18 截留分子量100090-33-517397-93-296T8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%5-羟色胺受体6检测试剂盒5mgSTR16009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体2(GRIA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽18 截留分子量200090-33-565907-75-796T胞浆型脂酶A2(cPLA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mgPCDH116009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体3(GRIA3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
红景天甙5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mg617-36-7HPLC98%5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mgPCDH150mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽18 截留分子量200090-33-565907-75-796T胞浆型脂酶A2(cPLA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mgPCDH116009-13-5高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体3(GRIA3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)20mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽18 截留分子量350024307-26-4477-84-996T褪黑素(MT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mgE604-44-4高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体4(GRIA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mg130-13-2HPLC98%5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mgE20mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽18 截留分子量350024307-26-4477-84-996T褪黑素(MT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mgE604-44-4高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体4(GRIA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号：透析袋 即用型 扁宽18 截留分子量500024307-26-449624-66-096TⅠ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%5羟色胺/血清素/血清胺检测试剂盒5mgGPP604-44-4高端化学试剂AMPA离子能谷氨酸受体4(GRIA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
