PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称：猪传染性胃肠炎病毒定量RT-PCR检测试剂盒
英文名称：详见说明书
编号： FSP2798
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Human β-actin(Beta actin) ELISA KitHuman f-Hb(Free Haemoglobin) ELISA Kit1-己炔 细胞TNF ALPHA蛋白表达荧光定量检测试剂盒
Human AA(Arachidonic Acid) ELISA KitHuman FLNα(Filamin A, Alpha) ELISA Kit1-己炔 TNF ALPHA蛋白表达西方杂交分析试剂盒
Human MBP(myelin basic protein) ELISA KitHuman FLOT2(Flotillin 2) ELISA Kit氟化氢吡啶络合物(Olah试剂)TNF ALPHA蛋白免疫共沉淀分析试剂盒
Human ACP(Acid phosphatase) ELISA KitHuman Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit氟化氢吡啶络合物(Olah试剂)TNF ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) ELISA KitHuman FOXC1(Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit2-(1H-吡唑-3-基)吡啶 细胞TNF BETA蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒
Human CHAT(Choline O-acetyltransferase) ELISA KitHuman ITG αⅤβ3(Integrin αⅤβ3) ELISA Kit2-(1H-吡唑-3-基)吡啶载玻片细胞TNF BETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human HbsAg(hepatitis B virus Surface Antigen) ELISA KitHuman FPB(Fibrinopeptide B) ELISA Kit3-羟基-2-吡啶甲酸冰冻切片组织TNF BETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human IMPDH2(Inosine 5′-Monophosphate Dehydrogenase 2) ELISA KitHuman fPSA(Free Prostate Specific Antigen) ELISA Kit3-羟基-2-吡啶甲酸石蜡切片组织TNF BETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
猪传染性胃肠炎病毒定量RT-PCR检测试剂盒标准试剂Trem样转录因子1检测试剂盒100mg1184-16-3mouse follicle-stimulating hormone, FSH Elisa KitHPLC98%Trem样转录因子1检测试剂盒100mgHib-Ab200mgCAS号：柯达定影液60-92-4 2827-56-796T非神经元性烯醇化酶(NNE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Trem样转录因子1检测试剂盒100mgHib-Ab17784-47-3高端化学试剂细胞色素P450家族成员2B6(CYP2B6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)250mgCAS号：柯达显影液60-92-4 288-88-096T肌肽(CAR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%Traf2结合蛋白检测试剂盒100mgAnti-Mpo17784-47-3高端化学试剂锚定蛋白重复域蛋白1(ANKRD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
标准品Traf2结合蛋白检测试剂盒100mg1184-16-3mouse follicle-stimulating hormone, FSH Elisa KitHPLC95%Traf2结合蛋白检测试剂盒100mgAnti-Mpo250mgCAS号：柯达显影液60-92-4 288-88-096T肌肽(CAR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%Traf2结合蛋白检测试剂盒100mgAnti-Mpo17784-47-3高端化学试剂锚定蛋白重复域蛋白1(ANKRD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)200mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 50mL37839-81-9 385-00-296T防御素β2(DEFβ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll作用蛋白检测试剂盒100mgRhoA8063-24-9高端化学试剂角蛋白18(KRT18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
标准试剂Toll作用蛋白检测试剂盒100mg85251-63-4Mouse cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen, CⅠCP Elisa KitHPLC98%Toll作用蛋白检测试剂盒100mgRhoA200mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 50mL37839-81-9 385-00-296T防御素β2(DEFβ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll作用蛋白检测试剂盒100mgRhoA8063-24-9高端化学试剂角蛋白18(KRT18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 100mL37839-81-9 496-72-096T早期生长应答因子2(EGR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)GC98%Toll样受体9检测试剂盒250mgSAαZGC8063-24-9高端化学试剂雌激素受体β(ERβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Toll样受体9检测试剂盒250mg85251-63-4Mouse cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen, CⅠCP Elisa KitGC98%Toll样受体9检测试剂盒250mgSAαZGC50mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 100mL37839-81-9 496-72-096T早期生长应答因子2(EGR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)GC98%Toll样受体9检测试剂盒250mgSAαZGC8063-24-9高端化学试剂雌激素受体β(ERβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)200mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 250mL37839-81-9 506-38-796T脂氧素A4(LXA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体7检测试剂盒20mgBKV8063-24-9高端化学试剂5-羟色胺受体1A(HTR1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Toll样受体7检测试剂盒20mgMouse deoxypyridinoline, DPD Elisa KitHPLC98%Toll样受体7检测试剂盒20mgBKV200mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 250mL37839-81-9 506-38-796T脂氧素A4(LXA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体7检测试剂盒20mgBKV8063-24-9高端化学试剂5-羟色胺受体1A(HTR1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)150mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 500mL61-19-8 506-46-796T胰脂肪酶(PL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体6检测试剂盒100mgBKV IgG Ab547-58-0高端化学试剂蕈碱型胆碱受体M3(CHRM3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Toll样受体6检测试剂盒100mgMouse deoxypyridinoline, DPD Elisa KitHPLC98%Toll样受体6检测试剂盒100mgBKV IgG Ab150mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 500mL61-19-8 506-46-796T胰脂肪酶(PL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体6检测试剂盒100mgBKV IgG Ab547-58-0高端化学试剂蕈碱型胆碱受体M3(CHRM3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)125mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 1000mL61-19-8 506-48-996T胰淀粉酶α2(AMY2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体5检测试剂盒20mgITG αⅤβ1547-58-0高端化学试剂糖蛋白A33(GPA33)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Toll样受体5检测试剂盒20mg1120-28-1Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks, PY Elisa KitHPLC98%Toll样受体5检测试剂盒20mgITG αⅤβ1125mgCAS号：蓝盖试剂瓶 国产 1000mL61-19-8 506-48-996T胰淀粉酶α2(AMY2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体5检测试剂盒20mgITG αⅤβ1547-58-0高端化学试剂糖蛋白A33(GPA33)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)10mgCAS号：蓝盖试剂瓶 进口 25mL61-19-8 51-36-596T精氨酰氨基肽酶(RNPEP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体4检测试剂盒20mgCyp7A1547-58-0高端化学试剂IL2诱导T细胞激酶(ITK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
标准品Toll样受体4检测试剂盒20mg1120-28-1Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks, PY Elisa KitHPLC98%Toll样受体4检测试剂盒20mgCyp7A110mgCAS号：蓝盖试剂瓶 进口 25mL61-19-8 51-36-596T精氨酰氨基肽酶(RNPEP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体4检测试剂盒20mgCyp7A1547-58-0高端化学试剂IL2诱导T细胞激酶(ITK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)100mgCAS号：蓝盖试剂瓶 进口 100mL61-19-8 5495-84-196T松弛素/胰岛素样肽受体1(RXFP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体3检测试剂盒100mg27-Hycl8004-87-3高端化学试剂CD5抗原样蛋白(CD5L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Toll样受体3检测试剂盒100mg92517-02-7Mouse Osteopontin, OPN Elisa KitHPLC98%Toll样受体3检测试剂盒100mg27-Hycl100mgCAS号：蓝盖试剂瓶 进口 100mL61-19-8 5495-84-196T松弛素/胰岛素样肽受体1(RXFP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体3检测试剂盒100mg27-Hycl8004-87-3高端化学试剂CD5抗原样蛋白(CD5L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)20mgCAS号：蓝盖试剂瓶 进口 250mL4578-31-8 551-92-896T抗神经节苷脂M1抗体(Anti-GM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体2检测试剂盒100mgITGα58004-87-3高端化学试剂神经元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Toll样受体2检测试剂盒100mg92517-02-7Mouse Osteopontin, OPN Elisa KitHPLC98%Toll样受体2检测试剂盒100mgITGα520mgCAS号：蓝盖试剂瓶 进口 250mL4578-31-8 551-92-896T抗神经节苷脂M1抗体(Anti-GM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%Toll样受体2检测试剂盒100mgITGα58004-87-3高端化学试剂神经元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)20mgCAS号：蓝盖试剂瓶 进口 500mL4578-31-8 55589-62-396T丝裂原激活蛋白激酶激活蛋白激酶2(MAPKAPK2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)97%Toll样受体1检测试剂盒100mgITGβ18004-87-3高端化学试剂维生素D结合蛋白(DBP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
