PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:莫拉氏菌属通用PCR定量试剂盒
英文名称:Moraxella spp.PCR
编号: FSP1899
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser305)磷酸化雌激素受体α抗体特价促销anti- Midkine antibody兼具RTase & DNA polymerase活性的PCR酶原阿片碱
ER-Alpha雌激素受体α抗体(用于western blot)特价促销anti- MIDN antibodyTaKaRa Tth茴芹内酯
WASF1/WAVE 1WAVE1蛋白抗体特价促销anti- MIER1 antibody兼具RTase & DNA polymerase活性的Hot Start型PCR酶山茱萸新苷
WASF2WASF2抗体特价促销anti- MIER2 antibodyTaKaRa Tth Hot Start Version白桦脂醛
ER-Alpha雌激素受体α抗体特价促销anti- MIER3 antibody高速高保真PCR酶新橙皮苷
ER-alpha/beta雌激素受体α/β抗体特价促销anti- MIF antibodyPrimeSTAR® Max DNA Polymerase(-)-细辛脂素
WFDC5P53应答基因蛋白5抗体特价促销anti- MIG antibody长链高保真PCR酶马兜铃内酰胺I
HIFPH4缺氧诱导因子脯氨酰4羟化酶抗体特价促销anti- MIG6; ERRFI1 antibodyPrimeSTAR® GXL DNA Polymerase脱水穿心莲内酯
莫拉氏菌属通用PCR定量试剂盒Rat Gamma Globulin Lyophilized Powder >= 96%, 10gphospho-ATM(Ser1981) 磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体 1-甲基环丙胺盐酸盐Succinic acid 琥珀酸
Rat Gamma Globulin Lyophilized Powder >= 96%, 100mgATF6 活化转录因子6抗体 4'-氨基-2'-羟基苯乙酮Maleicacid 马来酸 Sigma
Rat Gamma Globulin Liquid >= 96%, 500mg, 10mg/ml, 50mlp107/RBL1 视网膜母细胞瘤样蛋白p107抗体 2-氨基-3-溴-5-吡啶磺酸Maleicacid 马来酸 国产
Rat Gamma Globulin Liquid >= 96%, 100mg, 10mg/ml, 10mlphospho-p107/RBL1(Ser975) 磷酸化视网膜母细胞瘤样蛋白p107抗体 2,4,5-三氟苯硼酸Maleicacid 马来酸 国产
Rat Gamma Globulin Liquid >= 96%, 10grams, 10mg/ml, 1 literATP4B 氢钾ATP酶通道蛋白抗体 4,6-二氟吲哚-2-羧酸毛地黄皂苷
Rat Gamma Globulin Liquid >= 96%, 1gram, 10mg/ml, 100mlRan/ARA24 雄激素受体相关蛋白24抗体 反式-4-氨基环己醇N,N-Methylene Bisacrylamide 甲叉双丙烯酰胺 Amresco
Rabbit Serum Albumin Lyophilized Powder >= 96%, 100g, from US rabbit serumphospho-p107(Thr369) 磷酸化视网膜母细胞瘤样蛋白p107抗体 1-氯壬烷N,N-Methylene Bisacrylamide 甲叉双丙烯酰胺 Amresco
Rabbit Serum Albumin Lyophilized Powder >= 96%, 100g, from imported rabbit serumATP5J ATP5J抗体 3,5-二氟-2,6-二氨基吡啶N,N-Methylene Bisacrylamide 甲叉双丙烯酰胺 Amresco
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。