深圳振强生物技术有限公司

今天希望通过对恩格列净过氧化杂质研究，能为客户对SGLT-2抑制剂-列净类化合物过氧化杂质研究提供帮助。SGLT-2抑制剂中最耀眼的两颗明星就是恩格列净和达格列净。据不完全统计，勃林格殷格翰的恩格列净22年的销售额就突破了82亿美金，阿斯利康的达格列净也在2022年卖出了近44亿美金。SGLT-2抑制剂系列化合物信息，如图1：

图1：SGLT-2抑制剂系列化合物信息

恩格列净目前有单方和复方（恩格列净二甲双胍），所以研发仿制的企业很多。根据振强内部数据，仅2023年向我司采购过恩格列净杂质的企业就超过了45家。目前QCS官网上总共收录了恩格列净杂质94个（扫描文末二维码，查看所有杂质列表）。本文将介绍我中心参照《恩格列净片》进口注册标准（标准号JX20150247）对恩格列净过氧化物进行的相关检测研究工作（恩格列净过氧化物结构信息如图2：）。

图2：恩格列净过氧化物结构信息

根据《恩格列净片》进口注册标准（标准号JX20150247）中有关物质方法，我中心首先对该过氧化物杂质进行了液相定性定位研究，色谱条件参照标准中的有关物质方法（见图3）

图3：片剂进口注册标准有关物质方法

参照此方法，我中心对实验室合成的恩格列净过氧化物进行了测试，该过氧化物杂质与恩格列净原料药的混合进样结果见图5，过氧化物杂质单独进样图谱结果见图4：

图4：恩格列净过氧化物检测色谱图

恩格列净过氧化物与恩格列净混合进样数据如图5：

图5：恩格列净及其过氧化物混样图谱

以上色谱结果中，恩格列净保留时间7.7分钟，过氧化物杂质保留时间3.6-3.8分钟呈双峰。由于过氧化物杂质是一对非对映异构体混合物（结构式见图6，关键手性以红色标注），进口注册标准条件对该结构有一定的分离效果因而产生双峰。

图6：产生双峰的手性碳位置图

QCS研发中心使用液质联用色谱（LCMS）对该样品进行了确认。通过方法优化，恩格列净过氧化物杂质样品的双峰结果可以在LCMS中得到复现（图7），通过对两个色谱峰的MS进行对比（图8&图9）验证了该结论。

图7：过氧化物双峰的LC-MS图谱

图8:过氧化物LC-MS图谱中RT=38.272min色谱峰（左）和RT=40.275min色谱峰（右）的MS结果（模式：正离子)

图9：过氧化物LC-MS图谱中RT=38.272min色谱峰（左）和RT=40.275min色谱峰（右）的MS结果（模式：负离子)

从LC-MS检测数据可以看到，恩格列净过氧化物所出的两个色谱峰在正离子模式下都出了[M+K]+的分子量，在负离子模式下都出了[M+HCOO]-的分子量，而且在正离子和负离子的模式下，两个色谱峰所处的分子量都是一样的。

此外，我研究中心对该样品进行了核磁共振波谱测试和二级质谱检测，该样品核磁波谱结果可以观测到产品结构信号；二级质谱结果中可见明确的次级离子碎裂结构，以上信息均符合产品结构。从核磁氢谱数据也能看到该产品存在两套峰，从侧面证明了该产品是一对非对应异构体化合物存在，如图10：

图10：恩格列净过氧化物HNMR图谱和二级质谱结果

除了以上工作外，我中心还根据《恩格列净片》进口注册标准（标准号JX20150247）中有关物质方法对恩格列净过氧化物（RM-E131628）进行了溶液稳定性检测，分别在配样后0、1、2、4、8、12、24小时下进样检测，样品放置在室温下，未避光，检测数据总结如下：

图11：恩格列净API（RM-E131600）及恩格列净过氧化物（RM-E131628）溶液稳定性数据汇总

从图11中可以看出，在室温（未避光）的条件下恩格列净过氧化物（RM-E131628）溶液相对稳定。可以看到在配样后不同时间点对恩格列净过氧化物和内标物（恩格列净API）的混合样品进行监控，结果显示该杂质稳定性良好，不同时间点内恩格列净过氧化物峰1、峰2保留时间和峰面积无显著变化（RSD值均小于2.0%）。说明在室温、未避光，样品溶液pH值为中性的条件下，恩格列净过氧化物的样品溶液是稳定的。

另外，我中心除了对恩格列净过氧化物（RM-E131628）做了HNMR、CNMR、DEPT、COSY、HSQC、HMBC和NOESY的全套核磁共振测试并提供相关图谱解析。若客户有意购买本公司恩格列净过氧化物（RM-E131628）产品，本公司将会与客户分享CNMR、DEPT、COSY、HSQC、HMBC和NOESY图谱及图谱解析的内容。如果您有采购意向，请联系小编吧。

除恩格列净过氧化物杂质产品外，我中心已经完成了对恩格列净过氧化物和达格列净过氧化物的研究。以上产品均使用相关注册标准方法进行了验证，如有需要也请联系小编吧。

我中心目前已经完成了对以下四个SGLT-2抑制剂-列净类化合物过氧化物的合成工作，卡格列净和艾托格列净过氧化物目前处于检测信息收集阶段，欢迎咨询。

图12：SGLT-2抑制剂过氧化物结构式信息

恩格列净过氧化物杂质是我中心已经非常成熟的产品，但是之前接到某客户反馈在msms条件下与别的供应商的数据有冲突，所以我中心也同步的检测了msms数据，并结合我们的核磁二维数据做了同步分析，大家可以放心使用。对此有疑问或者需求的客户可以联系我们。