荷叶提取物

荷叶提取物为睡莲科植物莲Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥叶提取物，主要含有生物碱类、黄酮类、挥发油类等成分。黄酮类物质，是大多数氧自由基的清除剂，对治疗冠心病、高血压等疾病有显著效果，并且有抗菌消炎的作用；既可作为心血管疾病的原料药，还可广泛应用于功能食品、保健食品、饮料、食品防腐保鲜剂及化妆品中。本信息是由Chemicalbook的侍艳编辑整理。 【基源】为睡莲科植物莲Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥叶。全国大部分地区均产。
【植物形态】呈半圆形或折扇形，展开后呈类圆形，全缘或稍呈波状。上表面深绿色或黄绿色，较粗糙；下表面淡灰棕色，较光滑，有粗脉21～ 22条，自中心向四周射出；中心有突起的叶柄残基。质脆，易破碎。稍有清香气，味微苦。

图1为荷叶 1.生物碱类
早期从荷叶中分离出荷叶碱(nuciferine),莲碱(roemerine)及O-去甲基荷叶碱(O-nornuciferine)3个单体成分, 现今已从荷叶中分离出众多生物碱化合物。根据母核结构不同可将荷叶生物碱分为以下三类。单苄基异喹啉类:包括亚美罂粟碱(armepa-vine)、N-甲基异衡州乌药碱(N-methylisococlaur-ine)、N-甲基衡州乌药碱(N-methylcoclaurine)。阿朴啡类:包括N-去甲基荷叶碱(N-nornuciferine)、O-去甲基荷叶碱(O-nornuciferine)、番荔枝碱(anonaine)、莲碱(roemerine)、鹅掌揪碱(lirioderine)、N-去甲基亚美罂粟碱(N-norarmepavine)、2-羧基-1-甲氧基阿朴啡(2-hydroxy-I-methoxyaporphine)。去氢阿朴啡类:去氢荷叶碱(dehydronuciferine)、去氢莲碱(dehydroroemerine)。
2.黄酮类化合物
从荷叶中分离到的黄酮类化合物有16 个，其中大部分是以槲皮素为母核，糖链有葡萄糖、木糖、半乳糖、鼠李糖等，也有山奈酚和杨梅素衍生物。
3.有机酸类
酒石酸(tartaricacid)、柠檬酸(citricacid)、苹果酸(malicacid)、草酸(oxalicacid)、葡萄糖酸(maltonicacid)、琥珀酸(aberacid)等。
4.挥发油类
顺－3－己烯醇和反－2－戊烯醇、1－戊烯－3－醇、反－2－己烯醛等。
5.其他成分
还含有β－谷甾醇、胡萝卜苷、有机酸、β－sitosterol－3－O－β－D－glucopyranoside、isophytol、trans－phytol、7，11，15－trimethyl－2－hexadecanone、10－eicosanol、24(R)－ethylcholest－6－ene－5α－ol－3－O－β－D－glucopyranoside、荷叶多糖、脂肪酸、蛋白质和微量元素等成分。 1.抑菌作用
荷叶乙醇提取物对青霉、酵母菌、黑曲霉和红酵母都有一定的抑菌作用，但对酵母菌和红酵母的抑菌效果好于对青霉和黑曲霉的抑菌效果，并且随着提取物浓度的增大，抑菌作用增强。
2.减肥降脂作用
荷叶黄酮类成分对高脂血症大鼠有明显降低血清胆固醇(TC)、降低血清甘油三酯(TG)、降低体重和升高血清HDL－C、HL和LPL酶活力的作用。而荷叶提取物能降低肌体消化能力、减少脂质和碳水化合物的吸收和加强油脂代谢及能量损耗的调节，从而有效抵制肥胖症。
3.抗氧化作用
用现代的电子自旋共振法自旋捕集技术研究荷叶水提物（LLE）对羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O 2-·）清除效果。结果显示26.94ìg·mL-1的LLE对次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系产生O2-·的清除率达65.6%，LLE浓度大于8.98mg·mL-1时可以全部清除由Fenten反应体系产生的·OH，大约40ìg·mL-1的LLE就可以清除O2-·。可见荷叶的水提物是一种较好的抗氧化剂，在较低的浓度下即可显示出非常强的抗氧化能力。并且荷叶的甲醇提取物的抗氧化性与BHA 相当，略高于á- 生育酚。
4.抗惊厥作用
荷叶碱对由氨基酸引起的神经兴奋无选择性抑制。荷叶碱对谷氨酸引起的神经兴奋具有抑制作用，但对由天冬氨酸引起的神经兴奋的抑制作用较弱，对乙酰胆碱诱导的兴奋作用没有抑制作用。
5.解痉作用
荷叶提取物所含荷叶碱类物质，对平滑肌有解痉作用。
6.降压作用
荷叶的浸剂和煎剂，在动物实验中能直接扩张血管，引起中等程度的降压作用。
7.其他作用
生物碱具有抗病毒、抗炎抗过敏作用；总生物碱抗有丝分裂的作用, 对胰脂肪酶有抑制作用；荷叶提取物有抑制HIV增殖的作用。 荷叶干燥样品20kg 经粉碎后， 70%乙醇12 倍体积中试化回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压浓缩后得浓缩液30L。将浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，正丁醇萃取2 次，浓缩后得乙酸乙酯部分495 g( A 部分) ，正丁醇部分700 g( B 部分) 。乙酸乙酯部分495 g( A 部分) 硅胶柱色谱粗分，石油醚-丙酮梯度洗脱( 1∶ 0 ～ 10∶ 1 ～ 3∶ 1 ～ 0∶ 1) 得到4 部分A1 ～ A4，其中A2部分硅胶柱色谱分离以石油醚-丙酮( 1∶ 0 ～ 30∶ 1) 梯度洗脱得到化合物1( 28 mg) ，2( 230 mg) ，3( 20 mg) ，4( 22 mg) ， 23( 28 mg) ， 24( 48mg) ，A3部分硅胶柱色谱分离以石油醚-丙酮( 10 ∶1 ～ 0∶ 1) 梯度洗脱得FrA3-1和FrA3-2，其中FrA3-1硅胶柱色谱分离以石油醚-丙酮( 5 ∶ 1) 洗脱，得到21( 56 mg) ，22( 17 mg) ，FrA3-2硅胶柱色谱以石油醚-丙酮( 3∶ 1) 洗脱，得到5( 25 mg) ，A4部分硅胶柱色谱分离以石油醚-丙酮( 3∶ 1 ～ 25∶ 1) 梯度洗脱，得到6( 29 mg) ，7( 16 mg) ， 25( 20 mg) 。
正丁醇部分700 g( B 部分) 经过D101 大孔树脂粗分，分别用水，30%， 50% 乙醇梯度洗脱，得到3部分B1 ～ B3，其中B1部分再硅胶柱色谱分离分别以氯仿-甲醇-水( 40 ∶ 8 ∶ 1) 洗脱，得到化合物14 ( 10mg) ， 15( 10 mg) ; 以氯仿-甲醇-水( 30∶ 8∶ 1) 洗脱得到化合物10( 150 mg) ，之后，此部分收集到的第13份( Fr. 13) ，经过Sephadex LH-20 ( 甲醇洗脱) 得到化合物8( 12 mg) ，第14 份( Fr. 14) ，经过SephadexLH-20( 甲醇洗脱) 得到化合物9( 14 mg) ; 最后，以氯仿-甲醇-水( 20 ∶ 8 ∶ 1 ) 洗脱，得到的第15 份( Fr. 15) 经过Sephadex LH-20( 甲醇洗脱) 得到化合物11( 15 mg) ，12 ( 8 mg) ，第16 份( Fr. 16) ，经过Sephadex LH-20( 甲醇洗脱) 得到化合物13( 6 mg) 。B2部分硅胶柱色谱分离以氯仿-甲醇-水( 40∶ 8∶ 1 ～0∶ 0∶ 1) 洗脱得到化合物27( 15 mg) 。B3部分以氯仿-甲醇-水( 240∶ 20∶ 1) 洗脱得到化合物16( 28 mg) ， 20( 85 mg) ，洗脱收集到的第31 份( Fr. 31 ) 再经过Sephadex LH-20 ( 甲醇洗脱) 得到化合物17 ( 14mg) 。第34 份经过Sephadex LH-20 ( 甲醇洗脱) 得到化合物18 ( 11 mg) ，第35 份以氯仿-甲醇-水( 120∶ 20∶ 1) 洗脱得到化合物19 ( 120 mg) ，26 ( 13mg) 。
分离得到27个化合物，分别为10-二十八烷醇( 1) 、β-谷甾醇( 2) 、1-十一烷醇( 3) 、1-二十烷醇( 4) 、胡萝卜苷( 5) 、6'-hydroxy-4，4'-dimethoxychalcone( 6) 、1-羟基-3，7，8-三甲氧基酮( 7) 、鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷( 8) 、chrysoeriol-7-O-β-D-glucoside( 9) 、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷( 10) 、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷( 11) 、金丝桃苷( 12) 、槲皮素-3-O-芸香糖苷( 13) 、紫云英苷( 14) 、异鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖-( 1→6) -［α-D-来苏糖-( 1→2) -β-D-葡萄糖苷］( 15) 、异鼠李素-3-O-α-D-来苏糖-( 1→2) -β-D-葡萄糖苷( 16) 、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷( 17) 、异鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖-( 1→6) -β-D-葡萄糖苷( 18) 、槲皮素( 19) 、山柰酚( 20) 、去氢荷叶碱(21) 、莲碱( 22) 、stigmast-7-en-3-O-β-D-glucopyranoside( 23) 、stigmast-7-en-3β-ol( 24) 、邻二羟基苯( 25) 、alangionoside L( 26) 、icariside B2( 27) 。 性状鉴别
叶片通常折叠成半圆形或折扇形，展开后呈类圆形，直径20～60cm。全缘或稍呈波状，上表面深绿色或黄绿色，较粗糙，下表面淡灰棕色，较光滑，有粗脉21～22条，自中心向四周射出，中心有突起的叶柄残基。质脆，易破碎。微有清香气，味微苦。
理化鉴别
(1)取粗粉0.5g，加乙醇5ml，沸水浴提取15min，冷后滤过，滤液浓缩至0.5ml，加1%盐酸1滴，加苦味酸试液1滴，有黄棕色沉淀; 加磷钼酸试液1滴，有绿色沉淀。
(2)取粗粉0.5g，加乙醇5ml，沸水浴提取15min，冷后滤过，滤液浓缩至0.5ml，加镁粉少许与盐酸2滴，加热后溶液呈红色。
紫外光谱鉴别
取样品粗粉0.1g，2份，分别置于50ml碘量瓶中，各加石油醚(60～90℃)、乙醇20ml，室温浸泡2h，振摇，滤过，滤液用相应的溶剂分别稀释5倍和20倍后，于岛津UV- 265FW型紫外分光光度计上测定其紫外光谱。测试条件：波长范围200～450nm，吸收度量程0～3A，狭缝1nm，扫描速度200nm/min，尺度扩张40nm/cm。结果荷叶λmaxPet为 409.2、267.0、226.2nm，λminPet为330.6、254.2、223.8nm;λmaxEtOH为 365.4、257.8、204.4nm，λminEtOH为321.4、252.8nm。

图2为荷叶的紫外光谱图
1.石油醚提取液 2.乙醇提取液 荷叶提取物有效成分（金丝桃苷）经对口腔致病菌的药理筛选实验显示，能明显抑制引起牙龈炎的致病菌，其有效抑菌浓度为5mg·mL-1。目前荷叶提取物已应用于牙膏产品中，并建立了其有效成分（黄酮类化合物）在牙膏中的定性定量检测方法。
用80%乙醇荷叶提取液对常见的几种食品微生物进行抑菌活性研究。结果表明，对各种供试菌种均有抑菌活性。其中对细菌及酵母菌，特别是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果最为显著，但对米根霉抑制作用较弱。荷叶的乙醇提取物对大多数供试菌的MIC（最低抑菌浓度） 值小于或等于8%。实验结果同时表明荷叶提取物在中、弱碱性条件下抑菌活性最强，并能耐受超高温瞬时的热处理。荷叶的超临界CO2萃取物（精油）对细菌、酵母、霉菌均有一定的抑菌活性，MIC不超过1.56 g·L-1 。 有人用荷叶水提物最大饱和浓度最大耐受量，给实验组小鼠灌胃以造成急性毒性模型，对照组灌等量蒸馏水。结果显示在中药毒性分析指标——小毒的7项指标中，荷叶符合其中5项指标，荷叶水提物LD50＞5000mg·kg-1。由此可见荷叶水提物基本无毒。 性味 苦，平。
功能主治 清热解暑，升发清阳，凉血止血。用于暑热烦渴，暑湿泄泻，脾虚泄泻，血热吐衄，便血崩漏。荷叶炭收涩化瘀止血。用于多种出血症及产后血晕。