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注射用核糖核酸

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注射用核糖核酸
注射用核糖核酸 用途与合成方法
  • 化学性质 本品是核糖核酸的无菌冷冻干燥制剂,为白色或类白色的冻干块状物,易溶于水。
  • 用途 能增进肝细胞蛋白质合成,改善氨基酸代谢,调节机体免疫功能,促进病变肝细胞恢复正常,降低血清谷丙转氨酶水平,改善肝炎患者血清蛋白电泳。主要用于肝病辅助药。
  • 生产方法 方法一、以牛、猪的肝脏为原料
    上清液的制备 牛肝或猪肝洗净,切块,加1-2倍量体积0.1mol/L氯化钠、0.5mol/L枸橼酸三钠0.001%、聚乙烯硫酸酯0.1% TritonX-100 (pH=7),捣碎机制成匀浆,离心20min,得上清液。
    健康牛、猪肝[氯化钠,枸橼酸三钠、PVS、TritonX-100]→[捣碎,离心20min]上清液
    提取、除蛋白 上清液加入等体积0.2mol/L三乙醇胺、1%十二烷基硫酸钠、0.002mol/L乙二胺四乙酸二钠(pH=9),搅拌,加等体积的90%苯酚(含0.2%8-羟基喹啉)及等体积氯仿,室温振荡30min,离心20min,得上清液,加等体积氯仿振摇,反复2-3次,至无蛋白层为止,离心,得上清液。
    上清液[三乙醇胺,SDS,EDTA,苯酚,氯仿]→上清液[氯仿]→[振荡,离心]上清液
    沉淀、除糖原 上清液加入1/10体积的20%乙酸钾、2倍体积的-20℃无水乙醇,O℃放置1h,离心,取沉淀,将沉淀溶于0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠-0.01mol/L乙酸钠溶液中,加入等体积2.5mol/L磷酸氢二钾,搅拌下加入等体积的乙二醇甲醚,0℃放置半小时,离心,得上清液。
    上清液[醋酸钾,冷乙醇]→[0℃,1h]沉淀[EDTA,醋酸钠,磷酸氢二钾,乙二醇甲醚]→上清液
    络合、洗涤 上清液在0℃下加入等体积的乙酸钠溶液和1/4体积的1%溴化十六烷基三甲基,并保持温度放置0.5h,离心,将沉淀用0.1mol/L乙酸钠溶液(含0.001 mol/L乙二胺四乙酸二钠)和75%乙醇洗至无泡沫为止。
    上清液[醋酸钾,冷乙醇]→[0℃,1h]沉淀[EDTA,醋酸钠,磷酸氢二钾,乙二醇甲醚]→上清液
    制剂 沉淀溶于0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠(含0.14mol/L氯化钠)溶液中,除菌过滤,测定含量,无菌灌装,冷冻干燥,即得。
    沉淀[EDTA,氯化钠]→[过滤]无菌RNA滤液[冻干]→RDA制剂
    方法二、以猪脾脏为原料
    上清液的制备 猪脾脏称重剪碎,加等量的含0.5%十二烷基硫酸钠、 0.14mol/L氯化钠、0.2%吐温-80和0.1%皂土的0.1mol/L乙酸缓冲液中 (pH=5),捣碎机捣碎,制得匀浆,离心,取上清液。
    沉淀[EDTA,氯化钠]→[过滤]无菌RNA滤液[冻干]→RDA制剂
    提取、除蛋白 上清液加入等体积含0.5%十二烷基硫酸钠、0.14mol/L氯化钠、0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠的0.01mol/L乙酸缓冲液中 (pH=0.5),搅拌,加等体积的80%苯酚(含0.1%8-羟基喹啉、0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠、0.01mol/L pH=5的乙酸缓冲液)室温振荡10min,离心 20min,得上清液,加1/2体积90%苯酚(由乙酸缓冲液配制),搅拌5min,离心,得上清液。
    上清液[SDS,氯化钠,EDTA,乙醇,80%苯酚]→[振荡10min, 离心20min]上清液[90%苯酚]→[振荡,离心]上清液
    RNA的制备 上清液加氯化钠至0.1mol/L,搅拌下加2.5倍体积的-20℃无水乙醇,10℃放置,离心10min,将沉淀溶于0.14mol/L氯化钠溶液中,加等体积氯仿,振荡10min,离心15min,取上清液加2.5倍体积的-20℃无水乙醇,离心10min,取沉淀,即为RNA。
    上清液[氯化钠,冷无水乙醇]→[放置,离心]沉淀[氯化钠,氯仿]→[振荡,离心]上清液[冷无水乙醇]→[离心]RNA沉淀
    制剂 沉淀用95%乙醇洗涤,离心25min,过滤,无菌分装,冷冻干燥,即得。
    RNA沉淀[95%乙醇]→[洗涤离心]沉淀[灭菌,分装]→[冷干]RNA制剂。
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