天然抗氧化剂---银杏叶提取物

银杏叶提取物是银杏叶中提取的天然活性物质，其主要成分为黄酮类和银杏苦内酯。为专一性PAF (platelet-activating factor，血小板活化因子) 受体拮抗剂。其药理活性有：改善脑循环与细胞代谢；提高红细胞超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性，降低细胞膜过氧化脂质 (MDA) 的产生，清除自由基，防止心肌细胞和血管内皮细胞受损；选择性拮抗血小板PAF引起的血小板聚集、微血栓形成和脂质代谢紊乱；改善心脏的冠脉循环，对缺血心肌起保护作用；增加红细胞变形能力，降低血液黏度，消除微循环障碍；抑制血栓素 (TXA2) 合成，刺激血管内皮细胞释放前列腺素PGI2。

【来源植物】
银杏叶为银杏科银杏属植物银杏(Ginkgo biloba L.)的叶子，其提取物(EGB)具有多种保健功能，广泛应用于食品及化妆品。银杏叶化学成分十分复杂，从中分离出化合物有140余种，黄酮类化合物和萜内酯类化合物是银杏叶两种主要活性成分。此外还含有聚戊烯醇、有机酸、多糖、氨基酸、酚类及微量元素等。据不完全统计，目前国际上标准银杏叶提取物是按德国Schwabe专利工艺生产的EGb761，外观为棕黄色粉末，略有银杏叶香味。化学组成为黄酮含量24%，萜内酯6%，白果酸小于0.0005%，原花青素类7.0%，羧酸类成分13.0%，儿茶素类2.0%，非黄酮苷类20%，高分子化合物4.0%，无机物5.0%，水分溶剂3.0%，其他3.0%。 


图1为银杏叶。

【化学成分】
1.黄酮类化合物
黄酮苷类(见图2)：山柰酚-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-0-葡萄苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、3’-O-甲基杨梅槲皮素-3-O-葡萄糖苷、洋芹素-7-葡萄糖苷、木樨草素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-鼠李糖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、3’-O-甲基杨梅槲皮素-3-O-芸香糖苷、丁香-3-O-芸香糖苷、杨梅槲皮素-3-O-芸香糖苷、槲皮素-3-鼠李糖-2-葡萄糖苷、山柰酚-3-鼠李糖-2-葡萄糖苷、山柰酚-3-葡萄糖-2，6-二鼠李糖苷、槲皮素-3-葡萄糖-2，6-二鼠李糖苷、异鼠李素-3-葡萄糖-2，6-二鼠李糖苷。
桂皮酸酯黄酮苷类：桂皮素-3-鼠李糖-2-(6-对羟基反式桂皮酰)-葡萄糖苷、山柰酚-3-鼠李糖-2-(6-对羟基反式桂皮酰)-葡萄糖苷、槲皮素-3-鼠李糖-2-(6-对羟基反式桂皮酰)-葡萄糖-7-葡萄糖苷、槲皮素-3-鼠李糖-2-(6-对葡萄糖氧基-反式桂皮酰)-葡萄糖苷、山柰酚-3-鼠李糖-2-(6-对葡萄糖氧基-反式桂皮酰)-葡萄糖苷。


图2 银杏叶黄酮苷元结构式

黄酮苷元：山柰酚(Kaempferol)、槲皮素(quercetin)、异鼠李素(isorhamnetin)、木樨草素(3’，4’，5’，7-四羟基黄酮)、三粒小麦黄酮(3’，4’，5’，5，7-五羟基黄酮)、杨梅槲皮素(3，4，5，3’，4’，5’-六羟基黄酮)、洋芹素(5，7，4’-三羟基黄酮)。

双黄酮类(见图3)：穗花杉双黄酮(amentoflavone)、银杏双黄酮(银杏素ginkgetin)、异银杏双黄酮(异银杏素isogenkgetin)、去甲银杏双黄酮(bilobetin)、金钱松双黄酮 (soiadopuydin)、5’-甲氧基去甲银杏双黄酮(5’-methoxybilobetin)。


图3 银杏叶中双黄酮的结构式

儿茶素类： 儿茶素 (catechin)、表儿茶素 (epicatechin)、没食子酸儿茶素 (gallocate-chin)、表没食子儿茶素 (epigallocatechin)、4， 8″-儿茶素没食子儿茶素 (4， 8″-catechin-gallocatechin)， 4-8”-没食子儿茶素(4， 8”-gallocatechingallocatechin) 等。

其他黄酮类化合物： 原花青素和原翠雀素。

2. 银杏内酯类 (见图4)
二萜类化合物银杏内酯 (ginkgolide) A、B、C、J (GM仅存在于银杏根皮中)， 倍半萜内酯白果内酯 (bilobalide)。


图4 银杏内酯和白果内酯分子结构式。

【抗氧化特点及机理】
银杏叶提取物可直接清除脂质自由基、脂质过氧化自由基和烷自由基等，终止自由基连锁反应链。同时还可参与调节和提高过氧化物歧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶的活性。EGB中黄酮类物质的抗氧化作用甚至超过维生素，且在体外具有抗自由基攻击性质。

不同方法提取的银杏提取物的抗氧化效果不同，粗提物与精制产物的抗氧化效果也不同。马希汉等研究发现不同制取方法所得银杏叶提取物对菜油的抗氧化效果最强的为石油醚-乙醇提取物，银杏叶粗提物的抗氧化能力略高于精制物，这可能是由于粗提物中含有其他抗氧化成分，如有机酸、氨基酸、单宁、生物碱等物质的增效作用。

【制备方法】
(1)有机溶剂提取法 目前国内外使用最广泛的方法就是有机溶剂提取法。由于其他有机溶剂有毒性或挥发性较大，因此一般采用乙醇作为萃取剂。张永红等经实验表明提取银杏叶中黄酮类化合物的较佳条件为70%乙醇做提取液，提取温度90℃，料液比为1：20，提取次数为3次，每次回流1.5h。

(2)酶提取法 王晖等实验表明银杏叶原料经纤维素酶预处理后浸提，总黄酮得率显著提高，得率可达到2.01%。

(3)超声波提取法 银杏叶经超声波处理后，细胞膜已经破碎，同时加速了叶粒的运动，促进了有效成分的溶出，因此超声波提取黄酮具有极大的优越性。刘晶芝等研究所得的实验结果表明，超声波提取的工艺条件为：超声频率40kHz，超声处理时间55min，温度35℃，静置3h，此时提取率为81.9%。

【应用】
银杏叶中黄酮类物质具有抗氧化性，可作为抗氧化剂添加于油脂及糕点中，其总黄酮多具黄色，且溶解性宽，既有水溶性，又有脂溶性，故总黄酮可起着色剂作用。银杏叶加工成超微粉末加于食品中。将银杏叶超微粉碎，按5% ～10%添加于糕点、饼干、面条、糖果、冰淇淋中，即可加工成具有保健作用的银杏叶食品。
银杏叶提取物在加拿大作为食品添加剂， 在德国和法国已批准为非处方药， 银杏叶载入美国药典(24版)， 银杏叶提取物在美国可用作饮食补充剂。

【临床功效】
银杏叶甘、苦、涩，平。归心、肺经。敛肺，平喘，活血化瘀，止痛。用于肺虚咳喘; 冠心病， 心绞痛，高血脂。
银杏叶提取物临床用于防治心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、高血压、高血脂症、脑出血痉挛、脑外伤后遗症等症；对气喘、记忆障碍、老年性痴呆症、老年性大脑紊乱、耳鸣、失聪、眩晕综合症等均有显著疗效；可用于预防中风和心肌梗死。

【药性与应用】
银杏叶提取物是银杏叶中提取的天然活性物质，其主要成分为黄酮类和银杏苦内酯。为专一性PAF (platelet-activating factor，血小板活化因子) 受体拮抗剂。其药理活性有：改善脑循环与细胞代谢；提高红细胞超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性，降低细胞膜过氧化脂质 (MDA) 的产生，清除自由基，防止心肌细胞和血管内皮细胞受损；选择性拮抗血小板PAF引起的血小板聚集、微血栓形成和脂质代谢紊乱；改善心脏的冠脉循环，对缺血心肌起保护作用；增加红细胞变形能力，降低血液黏度，消除微循环障碍；抑制血栓素 (TXA2) 合成，刺激血管内皮细胞释放前列腺素PGI2。经胃和小肠吸收60%以上，1.5～2h达峰值，t1/2为2～4h。与腺体、神经元组织、胰脏有较高的亲和力。临床应用于冠心病心绞痛： 对心绞痛、胸闷、气短有明显改善，可减少心绞痛发作次数、程度和硝酸酯类用量，改善心电图表现，降低血液黏滞度，提高SOD活性，降低脂质过氧化酶，可作为冠心病、高黏血症的首选药。脑血管疾病： 脑梗死、脑血管痉挛，能改善眩晕、耳鸣等症状，对脑血管疾病的治疗，可作为首选药。老年性脑功能紊乱、脑动脉硬化、脑萎缩： 对认知、记忆、情感、睡眠障碍及老年性痴呆等均有一定疗效。对上述疾病，是目前长期应用较安全而有效的制剂。

【药代动力学】
(1) 类黄酮的药代动力学
给大鼠口服大剂量EGb (类黄酮和萜内酯等活性物质的合剂)，发现在受试动物尿中有了7种不同的苯烷酸，但在尿中(0～5天内)和血中(0～6小时)既未发现葡萄苷酶，也未发现糖苷配基，然而在血中发现4种尿代谢产物。
(2) 萜内酯的药代动力学
口服EGb761时， 萜类物质的生物利用率为85%～95%。对动物及人体内银杏苦内酯B的大量研究结果表明， 肝内的各种酶不能使其代谢， 它仍存在于体液中， 没有变化。在生物pH达到平衡时， 银杏苦内酯的内酯环处于闭合或部分开张状态。Schwabe实验室分三种不同剂量(30mg/kg、55mg/kg、100mg/kg)对大鼠进行了药代动力学研究， 其结果表明， 银杏苦内酯A、B和白果内酯的动力学呈剂量线性状， 其半寿期分别为1.8小时、2.1小时和2.3小时， 但在人体内半衰期较长， 银杏苦内酯B约为8小时。

【药理作用】
1. 对心血管系统的作用
（1）银杏叶提取物能抑制正常人血清中的血管紧张素转换酶(ACE) 的活性， 从而抑制小动脉收缩， 扩张血管，增加血流量。

（2）银杏叶提取物能阻止静注丁哌卡因引起的雄鼠心肌衰退， 抑制缺氧引起的人和猪冠状动脉收缩以及能消除PAF(血小板激活因子) 引起狗的心率不齐， 还能抑制离体豚鼠心脏过敏引起的心功能失调。

（3）银杏叶提取物能显著扩张麻醉猫、狗的脑血管， 增加脑血流量， 降低脑血管阻力。银杏叶提取物能阻止静注内毒素引起的增加肠系膜的微血管直径。在犬的内毒素模型上， 银杏叶提取物抑制血液动力性改变; 在羊肺模型上， 银杏叶提取物抑制内毒素引起的淋巴流动紊乱而致的高血压和肺水肿。

（4）给大鼠腹腔注射银杏叶黄酮每日5ml/kg， 40天后， 血清甘油三酯含量明显降低。给接受正常和过多胆固醇食物的兔子， 口服银杏叶提取物 (每天20mg/kg)， 一个月后， 接受致动脉粥样硬化食物兔子的血浆和主动脉中过高酯化胆固醇含量大大降低， 但游离胆固醇水平未变。

（5）银杏萜内酯是具有高度专属性的PAF受体阻断剂， 银杏叶提取物或银杏萜内酯能抑制血小板的活化因子 (PAF) 和环氧化酶或脂氧化酶。银杏叶提取物很好地被耐受了且拮抗血小板由PAF引起的聚集， 但对ADP引起的聚集无效果。

2. 对中枢神经系统的作用
（1）银杏叶提取物通过抑制PAF的作用而影响内分泌系统及影响免疫系统与中枢神经系统的相互作用， 能够促进大脑循环代谢， 改善记忆功能。

（2）银杏萜内酯具有抗忧郁作用， 其抗忧郁作用与中枢单胺能神经系统有关。

（3）银杏叶提取物能明显改善由NaNO2所致的缺型记忆损伤外， 其抗缺氧作用可能与其增加脑血流量和改善缺氧时脑能量代谢有关。

（4）银杏叶提取物大大改善由两侧颈动脉结扎和再循环引起的沙土鼠脑行为失调和阻止局部缺血和再充血而致沙土鼠脑损伤; 增强狗多病灶脑局部缺血后的早期神经元恢复和减少沙土鼠脑海马中因局部缺血后的神经元损伤; 极大地减少杂种狗局部缺血脑中ATP、AMP、肌酸和磷酸肌酸的损失。显示银杏苦内酯B能用于中风的临床治疗。

3. 对消化系统的作用
（1）银杏叶提取物能显著改善PAF和内毒素所致鼠胃、肠溃疡， 并能部分抑制乙醇对胃的损伤。

（2）结扎胆管而致肝硬化的老鼠中， 与安慰剂对照， 静注银杏叶提取物大大降低肝门静脉压， 同时降低心脏指数， 门静脉分支的血液流量， 并能提高系统血管耐受性， 这就显示银杏叶提取物对肝硬变有潜在治疗作用。能阻断蛙皮缩胆囊肽引起的鼠急性胰腺炎中氧自由基的形成，银杏萜内酯B在治疗急性胰腺炎中可能有作用。

4.对呼吸系统的作用
（1）银杏叶的乙醇提取物对气管平滑肌具有直接松弛作用，且能解除磷酸组织胺和乙酰胆碱对豚鼠离体气管的致痉作用，制止豚鼠组织胺性哮喘发作。
（2）静注银杏叶提取物可抑制PAF和卵清白蛋白诱导的鼠支气管收缩和高反应性，阻止抗原引起的支气管收缩，但对消炎痛引起的支气管高反应无作用。
（3）雾化银杏叶提取物的吸入不仅抑制支气管收缩作用，而且抑制了PAF所致的白血细胞和嗜酸性细胞减少，银杏叶提取物在抑制和治疗支气管高反应性中有重大意义。

5.抗衰老作用
银杏叶中的银杏双黄酮、异银杏双黄酮、银杏素及槲皮素，均有抑制脂质过氧化作用，特别是槲皮素具有更强的抑制活性。大鼠作实验，发现水提银杏叶总黄酮(0.95mg/ml)有较明显的降低脂质过氧化作用，酸提银杏叶总黄酮(1.9mg/ml)有提高血清铜锌SOD活性和降低血粘度的作用，同时SGPT活力降低。

7.在移植排斥及其它免疫反应中的作用
银杏叶提取物可以延长移植皮肤、异位心脏异种移植、正位肝异种移植的存活时间。银杏叶提取物能抑制人体对KC526目标细胞的自然杀伤细胞活性，也能阻止干扰素引起的自然杀伤细胞活性。

8.抗肿瘤作用
银杏叶绿叶粗提物即脂溶性部分能抑制EB病毒，十七碳烯水杨酸、白果黄素(Bilo-betin)均有很强的抑制活性;银杏总黄酮能增加荷瘤小鼠胸腺重量及SOD活性水平，调动机体内在的抗肿瘤能力;槲皮素与杨梅黄素能抑制致癌物的发生。

【毒副反应】
银杏叶提取物的LD50，静脉给药为(1202.5±141.3)μg/g，相当于生药(7.8±0.9)g/Kg;灌胃给药为(17.9±1.0) g/kg，相当于生药(116.4±6.5) g/kg。给狗注射临床常用量体裁10～40倍的药物1周，出现恶心、呕吐、腹泻、食欲减退等，组织切片发现小肠粘膜分泌亢进，麻醉狗、家兔的肠蠕动增强，注射给药局部血管变硬。

白果酚和银杏毒均有溶血作用，银杏毒对蛙的中枢神经系统有麻醉作用。兔静脉注射银杏毒0.2g/kg，先有短暂的升压作用，而后血压下降，呼吸困难，动物惊厥而死;黄酮醇一般剂量对血液凝血系统无影响，再大剂量可妨碍血凝固。异银杏双黄酮小鼠尾静脉注射的LD50为242mg/kg，急性中毒症状有呼吸急促，匍伏不动，均死于呼吸麻痹。

白果酸有溶血作用。银杏的黄酮类化合物用治疗量的100～1000倍时，对豚鼠能引起血压中等强度降低，呼吸加快，心率减慢。

【注意与禁忌】 银杏叶提取物的不良反应：偶有胃肠道不适，如纳差、恶心、便秘、便稀、腹胀等; 也可有心率增快、乏力等，但都不影响治疗。长期口服应定期复查血流变有关指标。有胃肠道症状者，可改为饭后服。

【药物相互作用】 本品与其他降低血黏度药物，如藻酸双酯钠、心脑舒通等合用，有协同作用，可提高疗效。

【规格】 片剂：40mg(提取物40mg，其中银杏总黄酮苷9.6mg);胶囊剂： 40mg。

【发展趋势】
银杏叶中含有少量原花色素和漆酚酸类，对人体尚有一定毒性，将银杏叶作为原料加工食品时要经特殊处理，以降低原花色素和漆酚酸含量。但在目前使用的剂量范围内，没有任何急性和慢性毒性，无致畸作用。卫生部已于1992年批准银杏叶提取物作为新的食品添加剂。近年来，银杏叶总黄酮已广泛应用于食品工业中，银杏叶的研究开发具有广阔的前景。

【参考资料】
1、https://www.chemicalbook.com/ProductChemicalPropertiesCB7195181.htm
2、唐春红 主编.天然防腐剂与抗氧化剂.北京：中国轻工业出版社.2010.第112-113页。
3、徐元贞 主编.新全实用药物手册.郑州：河南科学技术出版社.2005.第523-524页。
4、侯团章 编著.中草药提取物·卷.北京：中国医药科技出版社.2004.第229-248页。